檢測(cè)方法
檢測(cè)HIV感染者體液中病毒抗原和抗體的方法，操作方便，易于普及應(yīng)用，其中抗體檢測(cè)尤普通。但HIV P24抗原和病毒基因的測(cè)定，在HIV感染檢測(cè)中的地位和重要性也日益受到重視。
抗體檢測(cè)
血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標(biāo)。根據(jù)其主要的適用范圍，可將現(xiàn)有HIV抗體檢測(cè)方法分為篩檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。
確證試劑
篩檢實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性血清的確證最常用的是Western blot（WB），由于該法相對(duì)窗口期較長(zhǎng)，靈敏度稍差，而且成本高昂，因此只適合作為確證實(shí)驗(yàn)。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高，WB已越來(lái)越滿足不了對(duì)其作為確證實(shí)驗(yàn)的要求。FDA批準(zhǔn)的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗(yàn)（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相對(duì)簡(jiǎn)單，整個(gè)過程在1-1.5小時(shí)內(nèi)即可結(jié)束。此法的主要缺點(diǎn)是需要昂貴的熒光檢測(cè)儀和有經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人員來(lái)觀察評(píng)判結(jié)果，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)法長(zhǎng)期保存?，F(xiàn)在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發(fā)布最終結(jié)果時(shí)以IFA的陰性或陽(yáng)性為準(zhǔn)，但不作為血液合格的標(biāo)準(zhǔn)。
篩檢試驗(yàn)
篩檢試驗(yàn)主要用于對(duì)供血員進(jìn)行篩查，因此要求操作簡(jiǎn)便，成本低廉，而且靈敏、特異。2012年，世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA，還有少數(shù)的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性，操作簡(jiǎn)單，僅需要實(shí)驗(yàn)室配備酶標(biāo)儀和洗板機(jī)即可應(yīng)用，特別適合于試驗(yàn)室大規(guī)模篩檢使用。
顆粒凝集實(shí)驗(yàn)是另一種操作簡(jiǎn)單方便，成本低廉的檢測(cè)方法，該方法結(jié)果可通過肉眼判定，靈敏度很高，特別適合發(fā)展中國(guó)家或大量篩選供血員時(shí)使用，缺點(diǎn)是必須使用新鮮樣品，特異性較差。
80年代后期發(fā)展起來(lái)的斑點(diǎn)印跡檢測(cè)（Dot-blot assay）是一種快速ELISA（Rapid ELISA）方法，這種方法操作極為簡(jiǎn)便，過程短暫，整個(gè)過程多數(shù)在5-10分鐘內(nèi)甚至3分鐘內(nèi)即可結(jié)束，但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。
人類免疫缺陷病毒抗體口腔粘膜滲出液檢測(cè)試劑盒（膠體金法）就屬于側(cè)向免疫層析法（金免疫）類別，基于免疫層析技術(shù)通過手工操作、肉眼讀取結(jié)果、20分鐘即可定性得出檢測(cè)結(jié)果的快速診斷試劑，用于檢測(cè)口腔粘膜滲出液樣本中的HIV-1型和HIV-2型抗體?？捎糜谧栽缸稍儥z測(cè)、不愿采血、暈針患者的初篩。該方法適用于初篩檢測(cè)，凡由該試劑測(cè)定為陽(yáng)性者，需進(jìn)行進(jìn)一步篩查確認(rèn)。
【HIV陰性】說(shuō)明從人體內(nèi)檢測(cè)不到HIV抗體，陰性符號(hào)以（-）表示。不能說(shuō)沒有感染HIV, 要看是什么時(shí)候檢測(cè)的，在窗口期內(nèi)，感染者的體內(nèi)還沒有產(chǎn)生HIV抗體，或還沒有產(chǎn)生足量的HIV抗體，這時(shí)HIV檢測(cè)是陰性結(jié)果，如果在窗口期之后檢測(cè)的，可以排除感染HIV的可能。
【HIV陽(yáng)性】說(shuō)明從人體內(nèi)檢測(cè)到了HIV抗體，陽(yáng)性符號(hào)以（+）表示。
檢測(cè)結(jié)果不定因素
感染還處于窗口期：從HIV進(jìn)入體內(nèi)到檢測(cè)這段時(shí)間還不夠長(zhǎng)，因此血清還沒有形成典型的抗體反應(yīng)
艾滋病進(jìn)展到終末期，抗體水平下降
其他非病毒蛋白抗體的交叉反應(yīng)：自身免疫性疾病、某些惡性疾病、懷孕、輸血或器官移植等情況下，身體可以產(chǎn)生一些抗體，其反應(yīng)與HIV P24核心蛋白抗體引起的反應(yīng)很相似。
抗原檢測(cè)
病原檢測(cè)主要指用病毒分離培養(yǎng)、電鏡形態(tài)觀察、病毒抗原檢測(cè)和基因測(cè)定等方法從宿主標(biāo)本中直接檢測(cè)病毒或病毒基因。由于前兩種方法難度大，且需要特殊設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員。因此僅抗原檢測(cè)和RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄－PCR)可用于臨床診斷。HIV-1P24抗原檢測(cè)可用于HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；HIV-1抗體陽(yáng)性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷；第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性，但HIV-1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷。P24抗原檢測(cè)一般用ELISA雙抗體夾心法試劑，試劑必須經(jīng)過SDA批準(zhǔn)注冊(cè)、在有效期內(nèi)，其陽(yáng)性結(jié)果必須依據(jù)試劑說(shuō)明書經(jīng)中和試驗(yàn)確認(rèn)。HIV-1P24抗原檢測(cè)的敏感性為30-90％，該結(jié)果僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診；HIV-1 P24抗原檢測(cè)陰性只表示在本試驗(yàn)中無(wú)反應(yīng)，不能排除HIV感染，臨床中一般不作為常規(guī)診斷項(xiàng)目。
核酸檢測(cè)
HIV核酸檢測(cè)可用于HIV感染的輔助診斷、病程監(jiān)控、指導(dǎo)治療方案及療效判定、預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展等。常用的HIV病毒載量檢測(cè)方法包括逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)（RT-PCR）、核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)（NASBA）、分支DNA雜交實(shí)驗(yàn)（bDNA）以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。值得注意的是，每一種HIVRNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測(cè)限，即可以測(cè)出的最低拷貝數(shù)或國(guó)際單位，RNA定量檢測(cè)時(shí)未測(cè)出不等于樣品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性檢測(cè)陰性，只可報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性，但不能排除HIV感染；HIV核酸檢測(cè)陽(yáng)性，可作為診斷HIV感染的輔助指標(biāo)，不能單獨(dú)用于HIV感染的診斷。報(bào)告HIV核酸定量檢測(cè)結(jié)果時(shí)應(yīng)按照儀器讀數(shù)報(bào)告結(jié)果，注明使用的實(shí)驗(yàn)方法、樣品種類和樣品量，當(dāng)測(cè)定結(jié)果小于最低檢測(cè)限時(shí)，應(yīng)注明最低檢測(cè)限水平。
HIV核酸定性檢測(cè)也可用于HIV感染的輔助診斷，在分析HIV基因亞型和變異等基礎(chǔ)研究中應(yīng)用。通常使用PCR或RT-PCR技術(shù)，使用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室通用的擴(kuò)增試劑，引物可來(lái)自文獻(xiàn)或自行設(shè)計(jì)，應(yīng)盡量覆蓋所有或常見的毒株，也可使用復(fù)合引物。報(bào)告定性檢測(cè)結(jié)果時(shí)應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物序列。此外，利用核酸檢測(cè)方法的高度敏感性，使用集合核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)和方法，對(duì)高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進(jìn)行集合核酸檢測(cè)，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測(cè)具有更高的成本效益。
培養(yǎng)方法
常用方法為共培養(yǎng)法，即用正常人外周血液分離單個(gè)核細(xì)胞，加PHA刺激并培養(yǎng)后，加入病人單個(gè)核細(xì)胞診斷及艾滋病的研究中。
將病人自身外周或骨髓中淋巴細(xì)胞經(jīng)PHA刺激48～72小時(shí)作體外培養(yǎng)（培養(yǎng)液中加IL2）1～2周后，病毒增殖可釋放至細(xì)胞外，并使細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，最后細(xì)胞破潰死亡。亦可用傳代淋巴細(xì)胞系如HT-H9、Molt-4細(xì)胞作分離及傳代。
HIV動(dòng)物感染范圍窄，僅黑猩猩和長(zhǎng)臂猿，一般多用黑猩猩做實(shí)驗(yàn)。用感染HIV細(xì)胞或無(wú)細(xì)胞的HIV濾液感染黑猩猩，或?qū)⒏腥綡IV黑猩猩血液輸給正常黑猩猩都感染成功，邊續(xù)8個(gè)月在血液和淋巴液中可持續(xù)分離到HIV，在3～5周后查出HIV特異性抗體，并繼續(xù)維持一定水平。但無(wú)論黑猩猩或長(zhǎng)臂猿感染后都不發(fā)生疾病
部份圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，聯(lián)系刪除
